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实验室检测沙门氏菌的关键控制要点分享!

食品实验室服务 2021-04-06 13:02:31

沙门氏菌的检测在国内的产品标准中几乎全部都有所涉及,随着2014年7月1日起《GB 29921-2013 食品安全国家标准 食品中致病菌限量》标准的实施,国内预包装产品的致病菌项目中的沙门氏菌检验项目也发生了变化,以前同一批次的样品中只要有1份未检出即可报告结果,而现在需要检验5份样品,每份都不得检出才能报告合格结果。这一限量标准的变化也增加了食品生产企业对生产环节的要求,同样也增加了一线检验人员的工作量。

 

现在市面上虽然已经有很多沙门氏菌的快速检测方法,但是对于国内大部分企业或者第三方检测机构来说,用的最多的应该还是《GB 4789.4-2016  食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》这一传统的方法。下面就跟大家交流一下我们在日常检测沙门氏菌需要注意的一些问题,如果有什么地方说得不对的也请大家批评指正。

 

一、硬件方面

沙门氏菌的检测要在二级生物安全实验室(需要配备生物安全柜)中进行,特别是有检出疑似菌进行生化鉴定以及血清学鉴定的时候,切记一定要在生物安全柜中进行操作,并做好相应的使用记录。

 

二、培养基、生化试剂及血清方面

目前食品微生物检测所涉及的培养基和生化试剂等都需要根据《GB4789.28食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》进行质量控制及验收。沙门氏菌检测中所用到的BS平板、XLD平板、沙门显色平板、TSI等培养基,还有生化鉴定试剂盒以及O多价诊断血清A-F,H多价诊断血清都需要使用标准菌株进行质量控制,以保证实验室最终检测结果的准确性,这里因为涉及到标准菌株的使用,需要在生物安全柜中操作,相应的记录也要有。


另外,用于二次选择增菌的TTB和SC培养基,以及用于选择分离的BS、XLD培养基建议现配现用,需要注意的是配制的时候只需要加热煮沸即可,这里建议盛装的容器(烧杯或三角烧瓶等)预先经过高压湿热灭菌,以减少污染杂菌对检测过程的干扰。还有TTB配制所需的碘液一定要避光保存。

 

三、检测过程方面

1、前增菌和二次增菌不可少

前增菌是为了使受伤菌得到修复。另外食品中的沙门氏菌含量一般都很少,而且会有多种细菌同时存在的情况。所以用前增菌和增菌分别进行筛选和培养,以便增加后期的分离培养的检出率。

 

2、要防止干扰及误判,尽可能多地挑取可疑菌

一般实验室都会挑取选择性培养基上典型的沙门氏菌特征菌落如黑色中央的菌落做后续鉴定,而未选取非典型菌落。通常的沙门氏菌在HE琼脂(HE)或木糖赖氨酸琼脂(XLD)上不发酵乳糖(不产生黄色菌落),而亚利桑那沙门氏菌具有缓慢发酵乳糖的特性,如实验人员缺乏足够经验,可能忽略黄色菌落,导致漏检。

 

还有,如果检品中的污染菌比较复杂,也要尽量多挑取可疑菌进行生化鉴定以及血清学鉴定。如弗氏枸橼酸杆菌可在24h 时形成具有沙门氏菌典型特征的菌落,生化反应与沙门氏菌相似,并且与沙门氏菌诊断血清有轻微的交叉反应,可能导致出现假阳性结果;粘质沙雷氏菌在科玛嘉沙门氏菌显色培养基上的颜色与典型的沙门氏菌的紫红色很接近。

 

实验人员切记不可只看选择性培养基上的特征和TSI 特征符合就报结果,没有把关键的生化反应(如赖氨酸脱羧酶和血清型试验A-F-O 多价)完成。这些都可能导致假阳性的结果。

 

3、TSI接种注意事项

实验的时候需要先划线再穿刺,如果先穿刺再划线,由于菌含量太高,如果产H2S变黑,底层产酸现象的观察会受影响,还有就是,如果产气比较多的话,培养基会被顶出老高,严重的话还有可能会顶开试管塞。

 

4、血清学鉴定注意事项

血清学鉴定的时候一定要用生理盐水做对照,以免出现假阳性的结果。

 

四、结果判定方面

实验人员一定要综合生化试验以及血清学鉴定的结果才能最终判定检出还是未检出沙门氏菌。

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