国内外阿那曲唑片溶出曲线相似性评价及采用GastroPlus建立体内外相关性模型的研究

国内外阿那曲唑片溶出曲线相似性评价及采用GastroPlus^TM 

建立体内外相关性模型的研究

Evaluation for the Dissolution Curve Similarity of Domestic and Overseas Anastrozole Tablets and Study on the Establishment in Vivo-in Vitro Correlation Model by GastroPlus^TM

作者

张凤妹，王建，李佳妮

浙江省食品药品检验研究院

浙江工业大学

摘要

目的  建立阿那曲唑片新溶出度检查方法，研究阿那曲唑的溶出行为，评价国内 3 家片剂产品与原研片溶出曲线 的相似性；并建立体内外相关性模型，预测口服阿那曲唑片的药动学参数，评价其生物等效性。

方法  新溶出度检查方 法：桨法，50 r·min^-1，溶出介质为水 900 mL，30 min 取样，HPLC 测定，限度为标示量的 80%。

通过GastroPlus^TM软件， 结合体外溶出实验结果，建立体内外相关性模型。

结果  新建立的溶出度检查方法在 0.22~1.10 μg·mL^-1内与峰面积呈良 好的线性关系，平均回收率为 99.3%(RSD=0.8%，n=9)。

国内 3 家制药公司产品与原研样品在 4 种溶出介质中的溶出曲 线均相似。

溶出曲线与软件模拟的体内行为非常相似，吻合度较高。

结论  采用浆法，转速为 50 r·min^-1，能有效的控制 本品的质量。

通过体内外相关性的分析，可见建立的体外溶出方法能较好地体现阿那曲唑片在体内的溶出行为。 

阿那曲唑为高效、高选择性的第 3 代非甾体 类芳香化酶抑制剂，用于治疗绝经期后的妇女晚 期乳腺癌，具有高溶解性、低渗透性的特点。

阿那曲唑片执行标准为新药转正标准第 66 册，所列出的溶出度检查方法为小杯法：100 r·min^-1， 30 min 取样；溶出介质：水 125 mL；限度：80% (HPLC，测定波长210 nm)。

但USP36版和BP2013、EP7.7、JP16 版均未收载该品种，且笔者认为转速 为 100 r·min1 不合理，因此本实验参照进口注册 标准 JX20020034 及相关文献，将小杯法改为 桨法，转速改为 50 r·min^-1，用 HPLC 检测，同时 进行方法学研究，拟建立一个准确度比较高的阿 那曲唑片溶出度方法。 

本实验根据国家食品药品监督管理局仿制药质量一致性评价-溶出试验指导原则，用 pH 1.2 溶液、pH 4.5 缓冲液、pH 6.8 缓冲液和水 4 种溶 出介质，以原研样品作参比制剂，评价了国内 3 家片剂产品与原研片溶出曲线的相似性，为中国 药典阿那曲唑片质量标准的修订提供科学依据。

本实验通过可模拟药物体内释放吸收行为的 GastroPlus 软件，依据阿那曲唑的理化性质和文献 报道的药动学参数，结合体外溶出实验结果，建 立体内外相关性模型,预测口服阿那曲唑片的诸 药动学参数，评价其生物等效性。 

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仪器与试剂 

Agilent 1260 液相色谱仪(包括在线真空脱气 机，四元泵自动进样系统，美国 Agilent 公司)； AT7 型溶出仪(采用针式取样方式，瑞士 SOTAX 公司)；Hanson 在线过滤器(孔径 10 μm，美国 Hanson 公司)；Sartorius CPA 2245 型电子分析天平 (德国赛多利斯公司)；Welch Ultimate XB-C₁₈ 柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm)。

试药：磷酸二氢钾、氢氧化钠、冰醋酸、醋 酸钠以及盐酸均为分析纯，均购自国药集团化学 试剂有限公司；溶出介质实验用水：娃哈哈纯净 水，均采用脱气装置经 40 ℃脱气 1 h 后立即使用。

阿那曲唑对照品(中国食品药品检定研究院， 批号：100770-201302，纯度：99.7%)。 

参比制剂阿那曲唑片(Astra Zeneca UK Limited 公司，批号：1309071、131001，规格：1 mg)； 受试样品(A 制药公司，批号：13102201，13110201， 13110202，规格：1 mg；B 制药公司，批号： 13122311，13122411，12050411；C 制药公司，批 号：2011001，2013003，2013005)。 

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方法与结果

1.溶出方法的建立

桨法， 以900 mL水为溶出介质， 转速为 50 r·min^-1，30 min 取样，HPLC 测定。 

色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：水-乙腈(60∶ 40)；流速：1.0 mL·min^-1；柱温：35 ℃；检测波 长：215 nm；进样量：100 μL。 

2.方法学验证

取阿那曲唑对照品约 22 mg，精 密称定，加乙腈 8 mL 使溶解，加水稀释制成系列 浓度溶液，按“2.1.2”项下色谱条件进行测定。

结果回归方程为 A=198.0C-0.4，相关系数 r=0.999 9， 试验表明，对照品溶液浓度在 0.22~1.10 μg·mL^-1内与峰面积有好的线性关系。

按处方比例，制成不含 主药的空白样品，取适量，加水适量，超声振荡， 并稀释至规定浓度，摇匀。

滤过，取滤液按“2.1.2” 项下色谱条件进行测定，辅料无干扰。 

按处方比分别精密称取相当于样 品标示量的 60%，80%，100%的阿那曲唑对照品 及相应量的空白辅料，加水适量，振摇使阿那曲 唑溶解，并加水至规定浓度，摇匀，滤过，按“2.1.2” 项下色谱条件测定，对本法的回收率进行考察。 

结果平均回收率为 99.3%，RSD 为 0.80%(n=9)。

结果表明，本法的回收率较高，可用于溶出度的 测定。

取阿那曲唑供试品溶液，按 “2.1.2”项下色谱条件，于 0，24，32，42 h 测定， 结果 RSD 为 0.8%，溶液在 42 h 内稳定。 

取国内 3 个主要厂家产品和原 研药各 1 批，按溶出度测定法(附录 X C 第二法)， 以水为溶出介质，转速为 50 r·min^-1，依法操作， 在 5，10，15，30，45 min 时，分别取溶液 10 mL， 滤过，并及时在操作容器中补充上述溶剂 10 mL。

另取阿那曲唑对照品约 22 mg，精密称定，加乙腈 8 mL 使溶解，加水稀释制成每 1 mL 中约含 1.1 μg 的溶液，作为对照品溶液。   

按“2.1.2”项下色谱 条件，精密量取上述 2 种溶液各 100 μL，注入液 相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算 出每片的溶出量。

实验结果见表 1 和图 1。

根据溶 出曲线试验结果，将取样时间定为 30 min。 

3.样品溶出度测定结果 

取 4 个厂家生产的阿那曲唑片，按“2.1”项 下溶出度检查方法测定，测得的溶出度结果见表 2。

根据样品溶出度检查结果，将溶出度检查限度 定为 80%。

4.国内外阿那曲唑片的溶出曲线 

取国内 3 个主要厂家产品和原研药各 1 批， 按“2.1”项下溶出度测定法，分别以 4 种介质 900 mL 为溶出介质，在 5，10，15，30，45 min 时取样，按“2.1”项下方法测定。  

4种溶出介质的配制方法：

①水：实验用水。 min^-1

②pH 1.2 溶出介质：取盐酸 7.65 mL，加水稀释至 1 000 mL，摇匀即得。

③pH 4.5 溶出介质：取 2 mol·L^-1醋酸溶液[取 120.0 g(114 mL)冰醋酸用水 稀释至 1 000 mL]14.0 mL 与醋酸钠 2.99 g，加水溶 解并稀释至 1 000 mL，摇匀即得。

④pH 6.8 磷酸 盐缓冲液：取磷酸二氢钾 1.7 g 和无水磷酸氢二钠 1.775 g，加水适量使溶解后，再加水稀释至 1 000 mL，摇匀，即得。

国内外阿那曲唑片在 4 种溶出介质中的溶出 曲线测定结果见图 2。

5.国内外阿那曲唑片溶出曲线相似性评价 

图 2 结果显示，A 制药公司和 C 制药公司生 产的阿那曲唑片在水、pH 1.2、pH 4.5、pH 6.8 溶 出介质中，15 min 时平均溶出率均>85%；B 制药 公司的产品在水、pH 1.2、pH 4.5 3 种介质中，15 min 时平均溶出率均>85%，在 pH 6.8 溶出介质中 与参比制剂平均溶出率的差值<10%，说明 3 个企 业的产品均与原研制剂溶出曲线相似。 

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 计算机模拟 GastroPlus^TM 软件建立阿那曲唑片 体内外相关性模型的研究 

GastroPlus^TM 软件是一款模拟预测药物在体 内吸收速度和程度的软件，它采用高级房室吸收 模型(ACAT 模型)作为吸收模型，可模拟原料药及 其制剂在动物和人体的吸收过程，并且内置多种 处置模型，模拟代谢过程。

目前该软件在建立药 物的体内外相关性、进行虚拟生物等效性实验等方面得到了较为广泛的应用。

本实验通过可模 拟药物体内释放吸收行为的 GastroPlus^TM软件，依 据阿那曲唑的理化性质和文献报道的药动学参 数，结合体外溶出实验结果，建立体内外相关性模 型，预测口服阿那曲唑片的药动学参数，评价其生 物等效性。

1.基础模型的创建 

阿那曲唑建模参数主要来自文献以及基于软 件计算值，具体数据列举见表 3。 

不同的文献中因采用的计算方法、实验人群 以及药品剂量的不同，因此得到的药动学参数存 在一定程度的差异，但药时曲线基本相似。

利用 GastroPlus^TM，构建阿那曲唑片的体内吸收曲线模 型，并且将模型中预测的药时曲线与文献报道中 的实际药时曲线进行对比，评价模型的准确性。 

对模型预测的口服1 mg阿那曲唑的药时曲线与赵 春艳等实测的药时曲线进行比较，结果显示， GastroPlus^TM 软件中构建的模型预测情况与实测 的药时曲线相似。

通常模型预测的 C_max 和 AUC 值 与实际测定的误差在 2 倍以内，可以证明建立的 模型比较准确，结果见图 3。 

2.体内外释放曲线的比较 

将原研阿那曲唑片体外各 pH 值介质中的溶 出曲线导入 IVIVCPlus 模块，进行相关性模型的 创建，并考察体外溶出曲线与体内释放曲线的相 似性。

结果见图 4(左侧：体外溶出曲线；右侧： 体内溶出曲线)。 

考察 4 种介质中的溶出曲线体内外相关性， 发现 4 种溶出介质中的溶出曲线与软件模拟的体 内行为非常相似，吻合度较高，说明所建立的体 外溶出方法能较好地体现阿那曲唑片在体内的溶 出行为。 

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讨论

1. 阿那曲唑片溶出曲线测定方法的选择 

根据药物溶出曲线测定和相似性比较技术指 导原则，主要参照进口注册标准 JX20020034 中的 溶出度检查方法。 

2.阿那曲唑片溶出量测定方法的选择 

阿那曲唑片规格小、辅料多，实验中较难滤 清，且生产厂家众多，辅料不一，可能会影响 UV 测定的结果，因此采用专属性强的进口注册标准 JX20020034 中收载的 HPLC 及液相色谱条件。 

3. 计算机模拟 GastroPlus^TM 软件的建立 

通过利用阿那曲唑药动学参数、软件计算数 据和文献数据，建立阿那曲唑体内生理药动学预 测模型，通过将原研阿那曲唑片体外各 pH 值介质 中的溶出曲线导入 IVIVCPlus 模块，进行相关性 模型的创建，分析阿那曲唑片的体内外相关性。 

4. 结论 

本实验研究的阿那曲唑片溶出度分析方法准 确度高，能有效测定阿那曲唑片溶出量。

溶出曲 线质量一致性评价结果，在 pH 1.2 溶液、pH 4.5 缓冲液、pH 6.8 缓冲液和水 4 种介质中，国内 A、 B、C 制药公司的产品与原研片一致。

溶出曲线与 软件模拟的体内行为非常相似，吻合度较高。